UGCG CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403055-ACT

ヒトUGCGはUDP-グルコース：セラミド グルコシルトランスフェラーゼをコードしており、ゴルジ体に局在する糖転移酵素として、セラミドをグルコシルセラミドへ変換することで糖スフィンゴ脂質生合成における最初の不可逆（コミット）段階を触媒します。この反応は細胞内セラミド量のバランスを調節し、膜マイクロドメインの構成、受容体シグナル伝達、小胞輸送、細胞間相互作用に影響する複雑な糖スフィンゴ脂質の下流産生を支えます。UGCG活性はスフィンゴ脂質代謝およびストレス応答経路と交差し、分化、アポトーシス感受性、炎症性シグナル伝達といったプロセスを形作ります。UGCGが関与する糖スフィンゴ脂質恒常性の破綻は、神経変性や代謝性の表現型と関連付けられており、脂質シグナルの変化が増殖や薬剤応答を調節し得る腫瘍学的文脈でも研究されています。

UGCG CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性UGCGの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

UGCG CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における UGCG 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUGCG転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性UGCGの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUGCG遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUGCG依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUGCG発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUGCG経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。