UBF CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400521

概要

UBTFは、上流結合転写因子（UBF）をコードしており、UBFはRNAポリメラーゼI（Pol I）依存的なリボソームDNA（rDNA）転写に必須の、高移動度群（HMG）ボックスをもつDNA結合タンパク質です。UBFはrDNAクロマチンの構造化を助け、Pol Iの前初期化複合体の形成を促進し、核小体の構造とリボソーム生合成を支えることで、細胞増殖の制御やプロテオスタシス（タンパク質恒常性）とも関連します。さらに、核小体ストレスシグナル伝達における役割や、細胞周期およびDNA損傷応答経路との協調を通じて、UBTF/UBF活性の変化は増殖能やゲノム安定性に影響し得ます。Pol I転写や核小体機能の破綻はがん生物学で繰り返し見られる特徴であり、神経発達性疾患や神経変性疾患の文脈でも関与が示唆されています。

UBF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるUBTF遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、UBTF内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、UBTFのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、UBFタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、UBFシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、UBTF欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• UBFの機能に不可欠なUBTFエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、UBTFゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• UBF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびUBF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、UBTF遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  UBF HDRプラスミド（h）および UBF HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUBTFホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUBTF標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。