UBE1L2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-412489-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- UBE1L2 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- UBE1L2ダブルニカースプラスミド（h）およびUBE1L2ダブルニカースプラスミド（h2）は、UBA6を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
UBE1L2 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-412489-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
UBE1L2 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-412489-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
UBA6は、E1ユビキチン活性化酵素であるUBE1L2をコードしており、ユビキチンをアデニル化して活性化し、それをE2酵素へ受け渡すことで、下流のE3リガーゼによる基質修飾を支え、ユビキチンおよびユビキチン様分子の結合反応を開始します。この活性は、ユビキチン依存的なプロテオスタシス（タンパク質恒常性）、タンパク質品質管理、シグナル因子の制御された分解を協調させ、結果として細胞周期の進行、ストレス応答、自然免疫シグナル伝達に影響を与えます。UBA6はまた、抗原処理や炎症シグナルを形作るユビキチン様修飾因子の活性化を介して、FAT10/UBD経路とも関連します。ユビキチンの活性化および結合カスケードの破綻は、神経変性、がんに伴うシグナル伝達の再配線、炎症性疾患の病態機構に広く関与するため、UBA6はユビキチン経路依存性を解明するうえで有用な標的となります。
UBE1L2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における UBA6 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、UBA6内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、UBA6の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、UBA6が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。