UBE1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402844

概要

UBA1は、ユビキチン様修飾因子活性化酵素1（UBE1）をコードしています。UBE1は、ATP依存的なユビキチン活性化を開始し、ユビキチンをE2結合酵素へ受け渡すE1酵素として、ユビキチン–プロテアソーム系の機能を駆動します。この上流の制御点を通じて、UBE1は全体的なタンパク質ターンオーバー、プロテオスタシス、ストレス応答に影響を与え、細胞周期の進行、DNA損傷シグナル伝達、自然免疫経路の制御などの過程に関与します。UBA1活性の撹乱は、ユビキチン依存的なシグナル伝達ネットワークを再編し、主要な制御タンパク質の安定性を変化させうるため、神経変性、がんにおけるプロテオスタシス依存性、脊髄性筋萎縮症を含むX連鎖疾患の研究において重要です。UBE1はユビキチン化の頂点に位置することから、遺伝学的な破壊は、細胞恒常性に対するユビキチン経路の寄与を直接的に解析する手段となります。

UBE1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるUBA1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、UBA1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、UBA1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、UBE1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、UBE1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、UBA1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• UBE1の機能に不可欠なUBA1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、UBA1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• UBE1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびUBE1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、UBA1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  UBE1 HDRプラスミド（h）および UBE1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUBA1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUBA1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。