UBE1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402844

Descripción general

UBA1 codifica la enzima activadora del modificador tipo ubiquitina 1 (UBE1), la enzima E1 que inicia la activación de la ubiquitina dependiente de ATP y transfiere la ubiquitina a las enzimas conjugadoras E2 para impulsar la función del sistema ubiquitina–proteasoma. A través de este punto de control aguas arriba, UBE1 influye en el recambio proteico global, la proteostasis y las respuestas al estrés, afectando procesos como la progresión del ciclo celular, la señalización de daño en el ADN y la regulación de vías de la inmunidad innata. La alteración de la actividad de UBA1 puede remodelar redes de señalización dependientes de ubiquitina y modificar la estabilidad de proteínas reguladoras clave, lo que la hace relevante para estudios de neurodegeneración, dependencias de proteostasis asociadas al cáncer y trastornos ligados al cromosoma X, incluida la atrofia muscular espinal. Dado que UBE1 se sitúa en la cúspide de la ubiquitinación, su alteración genética ofrece un enfoque directo para dilucidar la contribución de la vía de la ubiquitina a la homeostasis celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO UBE1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen UBA1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del UBA1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de UBA1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína UBE1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en UBA1 para la investigación de la señalización de UBE1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de UBA1 críticos para la función de UBE1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de UBA1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido UBE1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido UBE1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus UBA1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR UBE1 (h) y el plásmido HDR UBE1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología UBA1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana UBA1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.