Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
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U2AF65 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423572
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- U2AF65 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico U2AF65, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:U2AF65 Anticorpo (MC3): sc-53942
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
U2AF65 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423572 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
U2af2 codifica a U2AF65, um componente essencial de ligação a RNA do fator auxiliar U2, que reconhece o trato polipirimidínico nos sítios de splicing 3′ e coopera com o U2AF35 para recrutar o snRNP U2 durante as etapas iniciais da montagem do spliceossomo. Ao acoplar a seleção do sítio de splicing à definição de éxons, a U2AF65 ajuda a moldar programas globais de splicing alternativo que regulam a progressão do ciclo celular, a diferenciação e as respostas ao estresse. A perturbação do splicing dependente de U2AF65 pode alterar o equilíbrio de isoformas em vias que controlam as respostas a danos no DNA e a apoptose, tornando U2af2 um alvo útil para dissecar fenótipos dirigidos pelo processamento de RNA. O reconhecimento desregulado de sítios de splicing e a atividade alterada do complexo U2AF são amplamente relevantes para mecanismos subjacentes a anomalias do desenvolvimento e à remodelação do transcriptoma associada ao câncer.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO U2AF65 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene U2af2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do U2af2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do U2af2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína U2AF65.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de U2af2 para a investigação da sinalização de U2AF65, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) U2af2 críticos para a função U2AF65
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos U2af2 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo U2AF65 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo U2AF65 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus U2af2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo U2AF65 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR U2AF65 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia U2af2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo U2af2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.