Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
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U2AF65 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423572
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- U2AF65 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico U2AF65, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: U2AF65 Anticuerpo (MC3): sc-53942
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
U2AF65 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423572 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
U2af2 codifica U2AF65, un componente esencial de unión a ARN del factor auxiliar U2 que reconoce el tramo polipirimidínico en los sitios de empalme 3′ y coopera con U2AF35 para reclutar la snRNP U2 durante las primeras etapas del ensamblaje del espliceosoma. Al acoplar la selección del sitio de empalme con la definición de exones, U2AF65 contribuye a moldear programas globales de empalme alternativo que regulan la progresión del ciclo celular, la diferenciación y las respuestas al estrés. La alteración del empalme dependiente de U2AF65 puede modificar el equilibrio de isoformas en vías que controlan las respuestas al daño del ADN y la apoptosis, lo que convierte a U2af2 en un nodo útil para desentrañar fenotipos impulsados por el procesamiento de ARN. El reconocimiento disfuncional de sitios de empalme y la actividad alterada del complejo U2AF son ampliamente relevantes para los mecanismos que subyacen a anomalías del desarrollo y a la remodelación del transcriptoma asociada al cáncer.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO U2AF65 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen U2af2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del U2af2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de U2af2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína U2AF65.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en U2af2 para la investigación de la señalización de U2AF65, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de U2af2 críticos para la función de U2AF65
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de U2af2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido U2AF65 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido U2AF65 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus U2af2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR U2AF65 (m) y el plásmido HDR U2AF65 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología U2af2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana U2af2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.