Tyro3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401412-ACT

O TYRO3 humano codifica a Tyro3, uma tirosina‑quinase receptora da família TAM que é ativada pelos ligantes dependentes de vitamina K GAS6 e PROS1 e sinaliza em conjunto com contextos de ligação à fosfatidilserina. Após a ativação, a Tyro3 regula a sobrevivência, a proliferação e a migração celulares por meio de vias que incluem PI3K–AKT, MAPK/ERK e sinalização por STAT, e contribui para a eferocitose e para a atenuação da imunidade inata via retroalimentação negativa mediada por TAM. A atividade de TYRO3 influencia a homeostase celular em tecidos imunes e neurais e tem sido associada a alterações na sinalização inflamatória e a fenótipos oncogênicos em diversos contextos tumorais. Como parte da rede TAM com AXL e MERTK, a Tyro3 também participa de crosstalk entre receptores que molda respostas de citocinas, a depuração fagocítica e a remodelação tecidual.

Tyro3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TYRO3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Tyro3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TYRO3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TYRO3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Tyro3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TYRO3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Tyro3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Tyro3 em células tumorais com expressão de TYRO3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.