TXA2R CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402468-ACT

TBXA2Rは、ヒトのトロンボキサンA2受容体（TXA2R）をコードする遺伝子であり、トロンボキサンA2に結合するGタンパク質共役型受容体（GPCR）です。TXA2Rは、血小板活性化、血管平滑筋収縮、炎症性シグナル伝達の制御に関与します。リガンドが結合すると、TXA2Rは主にGq/11およびG12/13経路に共役し、ホスホリパーゼCの活性化、細胞内カルシウム動員、RhoAシグナル、さらに細胞形態変化、分泌、接着に影響する下流のMAPK応答を促進します。この受容体は、エイコサノイド代謝と止血および血管恒常性を統合する役割を担い、血栓形成の生物学、血管反応性、炎症性微小環境といった文脈で頻繁に研究されています。TXA2Rシグナルの異常は、血小板機能の破綻や血管病態の機序と関連づけられており、心代謝疾患や免疫関連疾患の研究モデルにおける重要性を支持しています。

TXA2R CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TBXA2Rの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TXA2R CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TBXA2R 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTBXA2R転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TXA2Rの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTBXA2R遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTXA2R依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTBXA2R発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTXA2R経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。