twist2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419989

Descripción general

Twist2 codifica un factor de transcripción de tipo hélice–bucle–hélice básica (bHLH) que regula programas de linaje mesenquimal, controlando decisiones de destino celular, proliferación y diferenciación durante la embriogénesis y la homeostasis tisular. En el ratón, Twist2 influye en redes transcripcionales vinculadas a procesos similares a la transición epitelio–mesénquima (EMT), la remodelación de la matriz extracelular y el diálogo con vías como TGF-β y Wnt, que moldean la morfogénesis y el comportamiento de las células del estroma. La actividad alterada de TWIST2 se ha asociado con anomalías del desarrollo y con respuestas inflamatorias y fibróticas desreguladas, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar los circuitos de regulación génica en la biología del tejido conectivo. Los modelos de pérdida de función permiten investigar cómo Twist2 coordina programas de represión/activación transcripcional en fibroblastos, precursores miogénicos y compartimentos estromales asociados al sistema inmunitario.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO twist2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Twist2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Twist2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Twist2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína twist2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Twist2 para la investigación de la señalización de twist2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Twist2 críticos para la función de twist2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Twist2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido twist2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido twist2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Twist2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR twist2 (m) y el plásmido HDR twist2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Twist2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Twist2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.