Plásmido CRISPR de Activación (h) TUSC3: sc-405571-ACT

TUSC3 (candidato supresor tumoral 3) codifica una proteína de membrana del retículo endoplásmico que funciona como subunidad del complejo oligosacariltransferasa (OST), apoyando la glicosilación N ligada co-traduccional y el control de calidad de proteínas secretoras y de membrana recién sintetizadas. A través de su papel en la homeostasis del plegamiento proteico, TUSC3 influye en la proteostasis del RE, la maduración de glicoproteínas y procesos de señalización posteriores sensibles al estado de glicosilación, incluidos el tráfico de receptores y las respuestas adaptativas al estrés. La expresión alterada de TUSC3 o su pérdida de función se ha vinculado a fenotipos del neurodesarrollo y se ha estudiado en contextos oncológicos en los que la glicosilación alterada y las vías de estrés del RE pueden remodelar programas de proliferación, adhesión y migración. Estas características hacen de TUSC3 un nodo útil para investigar la glicoproteostasis, las vías asociadas al RE y redes de regulación génica relevantes para la biología de enfermedades en modelos de células humanas.

TUSC3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TUSC3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TUSC3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TUSC3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TUSC3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TUSC3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TUSC3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TUSC3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TUSC3 en células tumorales con expresión de TUSC3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.