TUSC3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405571-ACT

TUSC3 (candidato a supressor tumoral 3) codifica uma proteína de membrana do retículo endoplasmático que funciona como subunidade do complexo oligosacariltransferase (OST), apoiando a glicosilação N-ligada co-traducional e o controlo de qualidade de proteínas secretoras e de membrana recém-sintetizadas. Através do seu papel na homeostase da dobragem proteica, a TUSC3 influencia a proteostase do RE, a maturação de glicoproteínas e processos de sinalização a jusante sensíveis ao estado de glicosilação, incluindo o tráfego de recetores e respostas adaptativas ao stress. A alteração da expressão de TUSC3 ou a perda de função tem sido associada a fenótipos do neurodesenvolvimento e tem sido estudada em contextos oncológicos em que a glicosilação perturbada e as vias de stress do RE podem remodelar programas de proliferação, adesão e migração. Estas características tornam a TUSC3 um ponto útil para investigar a glicoproteostase, vias associadas ao RE e redes de regulação génica relevantes para a biologia da doença em modelos de células humanas.

TUSC3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TUSC3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TUSC3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TUSC3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TUSC3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TUSC3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TUSC3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TUSC3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TUSC3 em células tumorais com expressão de TUSC3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.