Plásmido Doble Nickase (m2) TudorSN: sc-425184-NIC-2

El gen Snd1 del ratón codifica TudorSN (nucleasa estafilocócica y proteína con dominio Tudor 1), una proteína multifuncional de unión a ARN que integra el procesamiento del ARN con programas de regulación génica al participar en el complejo de silenciamiento inducido por ARN, la represión mediada por microARN y eventos asociados al espliceosoma. TudorSN contribuye al control de la estabilidad y la traducción del ARNm y se ha vinculado con la corre-regulación transcripcional, la dinámica de los gránulos de estrés y vías de señalización lipídicas/metabólicas en diversos tipos celulares. La actividad desregulada de Snd1/TudorSN se asocia con estados proliferativos e inflamatorios alterados y se estudia con frecuencia en el contexto de la señalización oncogénica, la regulación inmunitaria y la neurobiología. La perturbación genética de Snd1 en modelos murinos facilita estudios mecanísticos de la regulación posranscripcional, las vías de pequeños ARN y las redes de interacción ARN–proteína mediante edición basada en CRISPR, genómica funcional y ensayos centrados en vías.

TudorSN El plásmido de doble nicasa (m2) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Snd1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Snd1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Snd1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Snd1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.