TTC35 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405724-ACT

EMC2は、小胞体膜タンパク質複合体（EMC）を構成する、保存性の高いテトラトリコペプチドリピート（TPR）含有因子TTC35をコードしています。この複合体は、多回膜貫通型膜タンパク質の膜への挿入と成熟を支援し、小胞体（ER）のプロテオスタシス、膜輸送、細胞ストレス応答に寄与します。EMCサブユニットの破綻は、受容体・チャネル・トランスポーターの生合成を損ない得るため、EMC2/TTC35により制御される過程が分泌経路機能の変化やERストレス感受性と関連することが示されています。その結果、EMC2は、膜タンパク質の折りたたみ不全や輸送不全によって引き起こされるタンパク質品質管理ネットワークおよび疾患関連表現型の文脈で、しばしば研究対象となっています。

TTC35 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EMC2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TTC35 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EMC2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEMC2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TTC35の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEMC2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTTC35依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEMC2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTTC35経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。