TSSK 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423532

概要

マウスのTssk2は、精巣特異的セリン/スレオニンプロテインキナーゼ2（TSSK2）をコードしており、減数分裂後の精子細胞（精子細胞期）の分化や、精子成熟に必要な分子リモデリング過程に関与する、生殖細胞で高発現するキナーゼです。TSSKファミリーのキナーゼは、クロマチン再編成、細胞骨格ダイナミクス、鞭毛構造の組み立てなどを含む精子形成（spermiogenesis）プログラムを、リン酸化依存的に制御すると関連づけられています。TSSKシグナル伝達の破綻は、実験モデルにおいて雄性不妊や精子機能異常と結び付けられており、TSSK2は生殖生物学の研究における有用な結節点となります。さらに、精巣に限定して発現するキナーゼとして、後期生殖細胞発生における組織特異的なキナーゼネットワークやプロテオスタシスを解析するためのモデルにもなります。

TSSK 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTssk2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tssk2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tssk2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TSSK 2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TSSK 2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tssk2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TSSK 2の機能に不可欠なTssk2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tssk2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TSSK 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTSSK 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tssk2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TSSK 2 HDRプラスミド（m）および TSSK 2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTssk2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTssk2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。