TSG-6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400765-ACT

TNFAIP6 codifica a proteína 6 induzível por fator de necrose tumoral (TSG-6), uma proteína secretada de ligação ao hialuronano que é rapidamente induzida por estímulos inflamatórios, como TNF e IL-1. A TSG-6 modula o remodelamento da matriz extracelular ao catalisar a transferência de cadeias pesadas do inibidor inter-α para o hialuronano, alterando a organização da matriz pericelular, a adesão de leucócitos e a hidratação tecidual. Por meio dessas atividades, a TSG-6 se integra a programas de sinalização mediados por citocinas, incluindo respostas inflamatórias associadas ao NF-κB e processos de reparo de feridas. A expressão desregulada de TNFAIP6/TSG-6 tem sido relatada em condições inflamatórias e fibróticas e no estroma associado a tumores, sustentando seu uso como um nó mecanístico para o estudo da regulação do microambiente.

TSG-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TNFAIP6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TSG-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TNFAIP6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TNFAIP6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TSG-6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TNFAIP6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TSG-6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TSG-6 em células tumorais com expressão de TNFAIP6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.