TRPC1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401040-ACT

TRPC1 codifica uma subunidade canônica de canal de potencial receptor transitório que contribui para a entrada de Ca²⁺ operada por receptor e operada por esvaziamento de reservas, moldando sinais de cálcio citosólico que regulam proliferação, migração, secreção e remodelamento do citoesqueleto. A atividade de TRPC1 integra-se à sinalização PLC/IP₃ e a efetores dependentes de cálcio, como a calmodulina e a calcineurina/NFAT, para modular programas transcricionais e metabólicos. Alterações na expressão de TRPC1 ou na função do canal têm sido associadas à desregulação da homeostase de cálcio observada em fenótipos celulares cardiovasculares, neuromusculares e relacionados ao câncer. Como uma proteína de membrana amplamente expressa, TRPC1 é frequentemente estudada em modelos de mecanossensação, respostas ao estresse oxidativo e processos ligados à transição epitélio-mesênquima.

TRPC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TRPC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TRPC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TRPC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TRPC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TRPC1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TRPC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TRPC1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TRPC1 em células tumorais com expressão de TRPC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.