Troponin T-SS Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402749-ACT

TNNT1 codifica a troponina T do músculo esquelético de contração lenta (Troponina T-SS), um componente central do complexo de troponina que ancora subunidades reguladoras à tropomiosina no filamento fino e ajusta as interações actina–miosina dependentes de Ca²⁺. Ao acoplar a sinalização de cálcio à mecânica de contração do sarcómero, o TNNT1 influencia a montagem miofibrilar, a geração de força contrátil e a fisiologia muscular específica do tipo de fibra. Alterações na expressão ou na função de TNNT1 estão ligadas à disfunção do músculo esquelético e foram associadas a fenótipos de doenças neuromusculares congénitas, tornando-o relevante para estudos de regulação sarcomérica, desenvolvimento muscular e respostas ao stress associadas à contractilidade. Assim, o TNNT1 é amplamente utilizado como marcador e nó mecanístico em vias que governam o acoplamento excitação–contração e a integridade das miofibras.

Troponin T-SS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TNNT1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Troponin T-SS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TNNT1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TNNT1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Troponin T-SS. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TNNT1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Troponin T-SS no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Troponin T-SS em células tumorais com expressão de TNNT1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.