TrkB Plasmide Double Nickase (h): sc-400142-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TrkB Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TrkB Double Nickase Plasmid (h) e il TrkB Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira NTRK2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TrkB Antibody (H-8): sc-136990
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TrkB Plasmide Double Nickase (h) | sc-400142-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TrkB Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400142-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NTRK2 codifica il recettore tirosin-chinasico TrkB, un recettore ad alta affinità per BDNF e NT-4/5 che regola la differenziazione neuronale, la plasticità sinaptica e la sopravvivenza dipendente dall’attività. Il legame del ligando induce l’autofosforilazione di TrkB e attiva le vie di segnalazione PI3K–AKT, RAS–MAPK/ERK e PLCγ, controllando programmi trascrizionali, rimodellamento del citoscheletro e processi calcio-dipendenti. Nella biologia umana, una segnalazione TrkB deregolata è stata implicata in fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici ed è anche studiata in contesti oncogenici, in cui un’attività recettoriale alterata può influenzare proliferazione e migrazione. In quanto nodo di via che integra segnali delle neurotrofine con risposte a crescita e stress, TrkB è ampiamente utilizzato in studi meccanicistici sulla funzione dei circuiti, le decisioni di destino cellulare e la trasduzione del segnale.
TrkB Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NTRK2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NTRK2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NTRK2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NTRK2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.