TrkB Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400142-ACT

NTRK2 codifica o recetor tirosina-quinase humano TrkB, um recetor de alta afinidade para o BDNF e outras neurotrofinas relacionadas, que controla a diferenciação neuronal, a plasticidade sináptica e a sobrevivência. Após a ligação do ligando, o TrkB ativa as cascatas de sinalização PI3K–AKT, MAPK/ERK e PLCγ, que coordenam programas transcricionais, remodelação do citoesqueleto e conectividade dependente da atividade. A sinalização do TrkB é central para o neurodesenvolvimento e para a manutenção dos circuitos, e a desregulação da expressão de NTRK2 ou do acoplamento das vias tem sido associada a alterações da função neuronal em contextos de doenças neuropsiquiátricas e neurodegenerativas. Como recetor nodal nas vias de neurotrofinas, o NTRK2 é frequentemente estudado pelos seus efeitos em transições de estado celular, respostas ao stress e expressão génica induzida por estímulos.

TrkB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NTRK2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TrkB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NTRK2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NTRK2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TrkB. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NTRK2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TrkB no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TrkB em células tumorais com expressão de NTRK2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.