TRIM10 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422691

Visão geral

O gene TRIM10 (Trim10) de camundongo codifica uma ligase E3 de ubiquitina contendo motivo tripartido, implicada no controle dependente de ubiquitina da estabilidade proteica e da renovação (turnover) de complexos de sinalização. Proteínas da família TRIM comumente participam da regulação da sinalização imune inata, de respostas ao estresse e de processos associados ao citoesqueleto ou à diferenciação, por meio da modulação da ubiquitinação e da proteostase. Em contextos hematopoéticos, proteínas TRIM são frequentemente associadas a programas de comprometimento de linhagem e maturação, tornando o Trim10 relevante para o estudo de redes regulatórias associadas à linhagem eritroide e, de forma mais ampla, da biologia de células imunes. A atividade desregulada da via de ubiquitina é uma característica recorrente em mecanismos de doenças inflamatórias e hematológicas, o que sustenta o uso de perturbações de Trim10 para investigar dependências de vias em modelos murinos relevantes.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TRIM10 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Trim10 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Trim10, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Trim10 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TRIM10.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Trim10 para a investigação da sinalização de TRIM10, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Trim10 críticos para a função TRIM10
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Trim10 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo TRIM10 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo TRIM10 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Trim10. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo TRIM10 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR TRIM10 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Trim10 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Trim10 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.