TRH-R1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2): sc-423506-KO-2

Visão geral

Trhr codifica o receptor 1 do hormônio liberador de tireotropina (TRH-R1), um GPCR de classe A que se liga ao TRH hipotalâmico para regular a sinalização do eixo hipófise–tireoide e o controle neuroendócrino do metabolismo. Após a ligação do ligante, o TRH-R1 acopla-se principalmente à proteína Gq/11 para ativar a fosfolipase C, promovendo a produção de IP3/DAG, a mobilização de Ca2+ intracelular e programas de transcrição dependentes de proteína quinase C. Em camundongos, a sinalização do TRH-R1 também se integra às vias MAPK/ERK e influencia a excitabilidade e a secreção hormonal em tecidos responsivos ao TRH. A desregulação da sinalização TRH–TRH-R1 tem sido associada a alterações na dinâmica do hormônio estimulante da tireoide (TSH) e a fenótipos endócrinos e metabólicos mais amplos, sustentando seu uso em estudos mecanísticos de homeostase neuroendócrina.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TRH-R1 (m2) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Trhr em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Trhr, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Trhr na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TRH-R1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Trhr para a investigação da sinalização de TRH-R1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Trhr críticos para a função TRH-R1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Trhr para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo TRH-R1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo TRH-R1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Trhr. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo TRH-R1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR TRH-R1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Trhr para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Trhr definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.