TRH-R1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m2): sc-423506-KO-2

概要

Trhr は、視床下部由来のTRH（甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン）に結合して下垂体―甲状腺軸のシグナル伝達および代謝の神経内分泌的制御を調節する、クラスAのGPCRである甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン受容体1（TRH-R1）をコードします。リガンドが結合すると、TRH-R1は主にGq/11と共役してホスホリパーゼCを活性化し、IP3/DAGの産生、細胞内Ca2+動員、ならびにプロテインキナーゼC依存的な転写プログラムを誘導します。マウスでは、TRH-R1シグナルはMAPK/ERK経路とも連動し、TRH応答性組織における興奮性やホルモン分泌に影響を与えます。TRH―TRH-R1シグナルの制御異常は、甲状腺刺激ホルモン（TSH）動態の変化や、より広範な内分泌・代謝表現型と関連づけられており、神経内分泌恒常性の機構研究における有用性が示されています。

TRH-R1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）は、mouse細胞株におけるTrhr遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Trhr内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Trhrのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TRH-R1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TRH-R1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Trhr欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TRH-R1の機能に不可欠なTrhrエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Trhrゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TRH-R1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTRH-R1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Trhr遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TRH-R1 HDRプラスミド（m）および TRH-R1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTrhrホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTrhr標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。