TRF2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423340
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- TRF2 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico TRF2, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:TRF2 Anticorpo (9F10): sc-47693
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
TRF2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423340 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O gene Terf2 de camundongo codifica o fator 2 de ligação a repetições teloméricas (TRF2), um componente central do complexo shelterin que se liga ao DNA telomérico de fita dupla e promove a formação de t-loops para proteger as extremidades dos cromossomos. O TRF2 suprime a ativação indevida da resposta a dano no DNA dependente de ATM e limita fusões cromossômicas extremidade a extremidade ao impedir a junção de extremidades não homólogas (NHEJ) nos telômeros, contribuindo assim para a estabilidade do genoma e a progressão fiel do ciclo celular. A interrupção da função de TRF2 leva ao desprotegimento (uncapping) dos telômeros, ao estresse replicativo e a aberrações cromossômicas, processos relevantes para pesquisas em biologia do envelhecimento, depleção de células-tronco e tumorigenese. Assim, Terf2 é amplamente utilizado como uma ferramenta para estudar vias de manutenção de telômeros e a interação entre telômeros, reparo de DNA e sinalização de checkpoints.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TRF2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Terf2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Terf2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Terf2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TRF2.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Terf2 para a investigação da sinalização de TRF2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Terf2 críticos para a função TRF2
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Terf2 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo TRF2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo TRF2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Terf2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo TRF2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR TRF2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Terf2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Terf2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.