TREX-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423502-ACT

Trex1 codifica a TREX-1, uma exonuclease de DNA 3′→5′ que degrada DNA citosólico de fita simples e de fita dupla para impedir a ativação inadequada da detecção imune inata. Ao limitar o acúmulo de espécies de DNA endógeno, a TREX-1 restringe a sinalização cGAS–STING e os programas a jusante de interferon tipo I, conectando o estresse de replicação do DNA e a integridade do genoma a respostas inflamatórias de transcrição. Em células de camundongo, a atividade de Trex1 também está ligada à eliminação de DNA derivado de retroelementos endógenos e de intermediários de replicação aberrantes, influenciando a expressão de genes estimulados por interferon e a homeostase imunológica. A desregulação do metabolismo de DNA mediado por TREX-1 é amplamente relevante para fenótipos autoinflamatórios e patologia associada ao interferon, tornando Trex1 um nó útil para estudar a detecção de ácidos nucleicos e a inflamação estéril.

TREX-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Trex1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TREX-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Trex1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Trex1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TREX-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Trex1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TREX-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TREX-1 em células tumorais com expressão de Trex1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.