TREML2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-435918-ACT

Treml2 codifica o receptor desencadeador expresso em células mieloides tipo 2 (TREML2), um receptor de membrana do tipo I enriquecido em células da linhagem mieloide e implicado na deteção imunitária inata e na sinalização inflamatória. O TREML2 tem sido associado à modulação dos estados de ativação de microglia e macrófagos, influenciando a produção de citocinas, as respostas fagocíticas e a comunicação cruzada com a imunidade adaptativa. Através destes processos, o Treml2 é frequentemente estudado em vias que regulam a neuroinflamação e a homeostase das células mieloides residentes nos tecidos, com relevância para modelos de neurodegeneração, inflamação autoimune e infeção. A sua localização à superfície celular e a expressão dependente do contexto tornam-no um alvo útil para dissecar a regulação imunitária mediada por recetores em sistemas murinos.

TREML2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Treml2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TREML2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Treml2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Treml2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TREML2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Treml2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TREML2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TREML2 em células tumorais com expressão de Treml2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.