TREM-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417344-ACT

TREM1 codifica o receptor desencadeador expresso em células mieloides 1 (TREM-1), um imunorreceptor fortemente expresso em neutrófilos e monócitos/macrófagos que amplifica a sinalização inflamatória em resposta a produtos microbianos e a sinais associados a perigo. Após a ligação ao ligante e o acoplamento ao adaptador TYROBP/DAP12, o TREM-1 ativa vias dependentes de SYK que convergem para as vias de sinalização de NF-κB e MAPK, promovendo a produção de citocinas e quimiocinas e modulando as funções efetoras da imunidade inata. Esse eixo interage com a sinalização de receptores do tipo Toll e com processos associados ao inflamassoma, influenciando a ativação, a migração de leucócitos e o tônus inflamatório tecidual. A atividade desregulada de TREM-1 tem sido associada a inflamação mieloide exacerbada em contextos de doenças infecciosas e inflamatórias, tornando-o um alvo útil para investigar a regulação das respostas imunes inatas.

TREM-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TREM1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TREM-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TREM1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TREM1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TREM-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TREM1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TREM-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TREM-1 em células tumorais com expressão de TREM1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.