TREK-1慢病毒激活颗粒(m): sc-421244-LAC
- 针对种属：mouse
- 200 µl 高滴度即用型CRISPR/dCas9慢病毒激活粒子
- TREK-1 慢病毒激活颗粒（m）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，通过细胞慢病毒转导，特异高效地上调目的基因的表达
- TREK-1慢病毒激活颗粒(m)包含以下SAM激活元素：一种是去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，它融合了转录活化域VP64；一种是MS2-p65-HSF1融合蛋白；一种是目标特定的20 nt向导RNA。它们还含有杀稻瘟菌素，潮霉素和嘌呤霉素抗性基因
- 一经转导，形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因，招募转录因子
- 由 TREK-1 慢病毒激活质粒 (m) 和 TREK-1 慢病毒激活质粒 (m2) 编码的 gRNA 靶向 Kcnk2 启动子的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
- 转染后，基因激活效率可以用抗体：TREK-1 Antibody (F-6): sc-398449，通过WB、IF或IHC分析
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TREK-1慢病毒激活颗粒(m) | sc-421244-LAC | 200 µl | $455.00 |
小鼠 Kcnk2 基因编码 TREK-1（K2P2.1），这是一种双孔域钾通道，可产生背景性 K+ 电导，从而稳定静息膜电位并调节细胞兴奋性。TREK-1 可被膜牵张、温度、细胞内 pH 以及脂质信号所门控，并受包括 cAMP/PKA 与磷脂酶介导信号在内的 GPCR 偶联通路调节。通过塑造动作电位放电以及 Ca2+ 依赖性信号传导，TREK-1 影响突触传递、机械转导以及应激反应相关的神经元适应。文献报道 KCNK2/TREK-1 活性失调与神经生理及多种神经系统表型相关，因此在研究兴奋性、痛觉处理和神经炎症相关信号方面具有重要意义。
TREK-1 慢病毒激活颗粒（m）通过将完整的协同激活介导体（SAM）转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中，满足了这一需求，从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 Kcnk2 表达。
TREK-1 慢病毒激活颗粒（m）通过慢病毒转导递送协同激活介导体（SAM）系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂：一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9（D10A和N863A突变），并携带布拉西定抗性基因； 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂；以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA（与两个MS2 RNA适配体融合）并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后，SAM组分得以稳定表达，并在Kcnk2转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处，VP64、p65和HSF1协同作用，招募内源性转录 machinery，从而驱动内源性TREK-1表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂，并保留原生的 Kcnk2 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势：稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活；高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要；且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性，扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选，以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。