TRB-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405781-ACT

A TRIB1 (TRB-1) humana é uma pseudocinase cataliticamente inativa que atua como um andaime regulando a transdução de sinal e o turnover proteico, notadamente por meio de interações com módulos de MAPK e ligases de ubiquitina como a COP1. Ao modular desfechos de sinalização dependentes de fosforilação e a estabilidade de reguladores transcricionais-chave, a TRIB1 influencia a proliferação celular, a diferenciação e programas responsivos ao estresse. Redes dependentes de TRIB1 estão implicadas na regulação imune e inflamatória e na homeostase do metabolismo lipídico, e a expressão desregulada tem sido associada à biologia de neoplasias hematológicas e a características de doenças cardiometabólicas. Esses atributos tornam a TRIB1 um alvo útil para dissecar a arquitetura de vias e o controle de estados transcricionais em modelos de células humanas.

TRB-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TRIB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TRB-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TRIB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TRIB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TRB-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TRIB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TRB-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TRB-1 em células tumorais com expressão de TRIB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.