TRAIL Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423498-KO-2
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- TRAIL O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico TRAIL, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:TRAIL Anticorpo (N2B2): sc-56245
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
TRAIL Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423498-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Tnfsf10 codifica, no camundongo, o ligante indutor de apoptose relacionado ao TNF (TRAIL), uma proteína de membrana do tipo II que pode ser liberada por clivagem proteolítica e sinaliza por meio de receptores de morte para iniciar a apoptose extrínseca via ativação da caspase-8 dependente de FADD. Além da sinalização apoptótica, o TRAIL modula, de maneira dependente do contexto, as respostas das vias NF-κB e MAPK, influenciando a sinalização inflamatória, a sobrevivência celular e a homeostase imunológica. Em modelos murinos, a biologia do TRAIL é frequentemente investigada em estudos de vigilância imunológica de tumores, autoimunidade e lesão tecidual, nos quais a sinalização por receptores de morte se cruza com redes de citocinas e respostas ao estresse.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TRAIL (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Tnfsf10 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Tnfsf10, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Tnfsf10 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TRAIL.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Tnfsf10 para a investigação da sinalização de TRAIL, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Tnfsf10 críticos para a função TRAIL
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Tnfsf10 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo TRAIL Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo TRAIL Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Tnfsf10. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo TRAIL Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR TRAIL (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Tnfsf10 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Tnfsf10 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.