TRAF2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400361-ACT

TRAF2 (fattore associato al recettore del TNF 2) è una proteina adattatrice e una ligasi E3 dell’ubiquitina che collega i membri della superfamiglia dei recettori del TNF alla segnalazione a valle, modellando le risposte infiammatorie e allo stress. Coordinando eventi di ubiquitinazione con legami K63, TRAF2 favorisce l’attivazione delle vie di NF-κB e MAPK e contribuisce al controllo di apoptosi e necroptosi attraverso il crosstalk con complessi dipendenti da RIPK1. TRAF2 influenza anche la segnalazione dell’immunità innata e dei recettori di riconoscimento dei pattern e può modulare la dinamica di JNK e di NF-κB non canonico tramite la regolazione della stabilità di NIK. Una segnalazione di TRAF2 deregolata è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi immunitaria, infiammazione cronica e programmi di segnalazione oncogenici in molteplici contesti patologici, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici della circuiteria di segnalazione del TNF.

TRAF2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TRAF2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TRAF2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TRAF2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TRAF2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TRAF2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TRAF2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TRAF2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TRAF2 nelle cellule tumorali con espressione di TRAF2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.