Tra-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404739-ACT

O TRA2B humano codifica a Tra-2, um regulador de splicing com ligação a RNA que reconhece elementos potenciadores de splicing exônicos e modula a inclusão de éxons em diversos alvos de pré-mRNA. A Tra-2 participa de redes associadas ao spliceossomo que moldam programas de splicing alternativo, controlando a progressão do ciclo celular, a diferenciação e as respostas transcricionais a estresse. A expressão ou atividade desregulada de TRA2B tem sido associada a alterações amplas de splicing observadas em contextos de câncer e de neurodesenvolvimento, nos quais o desequilíbrio de isoformas pode remodelar a sinalização e o metabolismo de RNA. Como um nó central da regulação gênica pós-transcricional, o TRA2B é frequentemente estudado para conectar o controle de splicing dependente de sequência à reprogramação de vias e a mudanças no transcriptoma associadas a doenças.

Tra-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TRA2B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Tra-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TRA2B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TRA2B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Tra-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TRA2B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Tra-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Tra-2 em células tumorais com expressão de TRA2B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.