TR2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403818-ACT

ヒトNR2C1はTR2というオーファン核内受容体をコードしており、細胞運命、代謝、内分泌シグナル伝達に関連する遺伝子発現プログラムを制御する、配列特異的な転写因子として機能します。TR2は核内受容体応答配列に結合し、コレギュレーターと相互作用して、分化、生殖生物学、発生過程に関わる転写ネットワークを調節します。細胞内経路においてTR2の活性は、クロマチン状態や転写の恒常性に影響し、系譜決定やストレス応答性遺伝子の発現を形作ることがあります。NR2C1/TR2の発現またはシグナル伝達の破綻は、分化状態の変化やがんに関連する転写プログラムと結び付くことが文献で報告されており、遺伝子制御研究における機構的な結節点としての有用性が示唆されています。

TR2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NR2C1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TR2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NR2C1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNR2C1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TR2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNR2C1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTR2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNR2C1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTR2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。