Plásmido CRISPR de Activación (h) TRβ: sc-401467-ACT

THRB codifica el receptor beta de la hormona tiroidea (TRβ), un receptor nuclear dependiente de ligando que se une a la triyodotironina (T3) y regula la transcripción a través de elementos de respuesta a la hormona tiroidea. TRβ coordina programas génicos que controlan el metabolismo celular, la función mitocondrial, la homeostasis de lípidos y carbohidratos y la diferenciación del desarrollo mediante interacciones con corregruladores y el crosstalk con RXR y las vías de señalización MAPK/PI3K. La actividad alterada de THRB se asocia con señalización endocrina desregulada y fenotipos metabólicos, y las perturbaciones en las redes transcripcionales mediadas por TRβ se estudian en contextos como la resistencia a la hormona tiroidea y los cánceres sensibles a hormonas. En células humanas, TRβ sirve como factor de transcripción modelo para investigar la ocupación de cromatina por receptores nucleares, la dependencia de cofactores y la regulación génica sensible a estímulos.

TRβ El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de THRB sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TRβ El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus THRB en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional THRB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TRβ. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo THRB y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TRβ en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TRβ en células tumorales con expresión de THRB silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.