Partículas Lentivirales de Activación (h) TPX2: sc-402581-LAC

TPX2 (proteína diana de Xklp2) codifica un factor de ensamblaje del huso asociado a microtúbulos que se concentra en los centrosomas y en los microtúbulos del huso para promover la activación de la quinasa Aurora A y estabilizar las fibras del cinetocoro durante la mitosis. Al coordinar la nucleación de microtúbulos, la organización de los polos del huso y la segregación cromosómica, TPX2 contribuye a regular la progresión del ciclo celular a través de la transición G2/M y respalda la fidelidad del control del punto de control mitótico. La expresión desregulada de TPX2 se asocia con frecuencia a fenotipos proliferativos e inestabilidad genómica, lo que la convierte en un marcador de uso extendido y en un nodo mecanístico en estudios de aneuploidía, respuestas al estrés mitótico y biología tumoral. La señalización dependiente de TPX2 se entrecruza con vías que controlan la dinámica de los microtúbulos, la función del centrosoma y redes de fosforilación reguladas por quinasas Aurora.

Las partículas de activación lentiviral TPX2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TPX2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TPX2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TPX2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de TPX2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TPX2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.