Tomosyn CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403625-ACT

ヒトのSTXBP5は、SNARE複合体の組み立てと小胞のプライミングを制御して膜融合およびエキソサイトーシスを調節する、syntaxin結合タンパク質であるトモシン（tomosyn）をコードします。トモシンは形質膜のt-SNAREと相互作用することで、神経系および内分泌系の文脈における調節性分泌に影響を与え、神経伝達物質やホルモン放出のダイナミクスを形成します。STXBP5による小胞輸送の調節は、シナプス伝達、血小板顆粒放出、インスリン分泌を司る経路で研究されており、その活性が心代謝および神経生物学的表現型と関連することが示されています。トモシンの発現や機能が変化すると、分泌依存性のシグナル伝達ネットワークが攪乱され得るため、STXBP5は疾患関連の細胞モデルにおける小胞融合の異常を検討するうえで有用な結節点となります。

Tomosyn CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性STXBP5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Tomosyn CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における STXBP5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSTXBP5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Tomosynの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSTXBP5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTomosyn依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSTXBP5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTomosyn経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。