Tom70 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402022-ACT

TOMM70 codifica a Tom70, uma subunidade receptora da translocase da membrana externa mitocondrial que reconhece pré-proteínas ligadas a chaperonas e auxilia a sua importação para as mitocôndrias. Ao coordenar a entrega de proteínas carreadoras hidrofóbicas e de outras proteínas mitocondriais codificadas no núcleo, a Tom70 ajuda a manter a proteostase mitocondrial, a biogênese da cadeia respiratória e a homeostase metabólica. A interrupção ou desregulação dos processos de importação associados ao TOMM70 está ligada a respostas de estresse mitocondrial que podem influenciar a sinalização imune inata, a apoptose e a adaptação celular à demanda energética. A capacidade alterada de importação mitocondrial tem sido estudada no contexto de neurodegeneração, disfunção cardiometabólica e remodelamento metabólico associado ao câncer, tornando o TOMM70 um ponto útil para investigar mecanismos de doença impulsionados pelas mitocôndrias.

Tom70 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TOMM70 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Tom70 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TOMM70 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TOMM70, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Tom70. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TOMM70 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Tom70 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Tom70 em células tumorais com expressão de TOMM70 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.