TNF-R2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423443

概要

Tnfrsf1b は TNF-R2（TNFRSF1B）をコードしており、TNF-R2 は主として免疫細胞、内皮細胞、および一部の間質系細胞集団に発現する TNF 受容体で、可溶性 TNF よりも膜結合型 TNF に選択的に応答します。TNF-R2 シグナル伝達はアダプタータンパク質を介して NF-κB および MAPK 経路の活性を調節し、細胞の生存プログラム、サイトカイン応答、組織リモデリングを形成します。リンパ球生物学において TNF-R2 は制御性 T 細胞の安定性と密接に関連し、炎症のバランスを調整する活性化誘導性シグナル伝達にも関与します。TNF-R2 軸の活性の破綻は、慢性炎症、自己免疫、神経炎症過程のモデルで示唆されており、TNF 経路の特異性を機序的に研究する上で有用な結節点となります。

TNF-R2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTnfrsf1b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tnfrsf1b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tnfrsf1bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TNF-R2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TNF-R2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tnfrsf1b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TNF-R2の機能に不可欠なTnfrsf1bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tnfrsf1bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TNF-R2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTNF-R2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tnfrsf1b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TNF-R2 HDRプラスミド（m）および TNF-R2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTnfrsf1bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTnfrsf1b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。