Plasmide Double Nickase (h) TNF alpha: sc-400124-NIC

TNF code le facteur de nécrose tumorale alpha (TNFα), une cytokine pro-inflammatoire pléiotrope produite principalement par les macrophages activés et les lymphocytes T, qui coordonne les réponses immunitaires innées et adaptatives. Le TNFα transmet ses signaux via TNFR1 et TNFR2 pour réguler les cascades canoniques NF-κB et MAPK, tout en influençant également l'apoptose et la nécroptose selon le contexte des récepteurs et l'engagement des adaptateurs en aval. Ces voies façonnent les réseaux de cytokines, le recrutement des leucocytes, l'activation endothéliale et le remodelage tissulaire en réponse à une infection ou à une lésion. Une activité du TNFα dérégulée est largement utilisée comme marqueur moléculaire dans les études sur l'inflammation chronique et les pathologies immuno-médiées, notamment l'auto-immunité, la biologie des maladies inflammatoires de l'intestin et la signalisation au sein du microenvironnement tumoral.

TNF alpha Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TNF dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TNF. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TNF. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TNF.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.