Plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM65 (h): sc-406584

Présentation

TMEM65 code la protéine transmembranaire 65, une protéine membranaire associée aux mitochondries impliquée dans le maintien de l’organisation de la membrane interne mitochondriale et le soutien de la phosphorylation oxydative. TMEM65 a été associée à la bioénergétique mitochondriale, à la régulation du potentiel de membrane et aux réponses cellulaires au stress métabolique, influençant ainsi la production d’ATP et l’homéostasie des espèces réactives de l’oxygène. Une altération de la fonction de TMEM65 a été reliée à des phénotypes de dysfonctionnement mitochondrial et présente un intérêt particulier pour l’étude des tissus à forte demande énergétique, où une respiration déficiente peut contribuer aux mécanismes des maladies neuromusculaires et cardiométaboliques. En tant que composant des voies mitochondriales, TMEM65 est utile pour explorer la signalisation mitochondriale, le contrôle qualité des organites et les programmes transcriptionnels d’adaptation au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM65 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TMEM65 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TMEM65, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TMEM65 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TMEM65.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TMEM65 pour l'étude de la signalisation de TMEM65, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TMEM65 essentiels à la fonction de TMEM65
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TMEM65 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TMEM65 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TMEM65 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TMEM65. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TMEM65 plasmide HDR (h) et le TMEM65 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TMEM65 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TMEM65 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.