Plásmido CRISPR de Activación (m2) TMEM214: sc-427183-ACT-2

El gen murino Tmem214 codifica TMEM214, una proteína transmembrana asociada al retículo endoplásmico implicada en la regulación de la apoptosis y de la señalización del estrés del RE. TMEM214 se ha relacionado con la modulación de la respuesta a proteínas mal plegadas y de la homeostasis de Ca2+, influyendo en las decisiones de supervivencia celular ante el estrés proteotóxico y las alteraciones de la función del RE. La desregulación del estrés del RE y de las vías apoptóticas es relevante para mecanismos estudiados en la neurodegeneración, la disfunción metabólica y la biología del cáncer, lo que convierte a Tmem214 en una diana útil para diseccionar estas rutas. La edición genética de Tmem214 en células murinas o en modelos in vivo permite investigar funcionalmente la interrelación entre estrés del RE y apoptosis, los programas transcripcionales posteriores y los fenotipos de adaptación al estrés en investigación biomédica.

TMEM214 El plásmido de activación CRISPR (m2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Tmem214 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TMEM214 El plásmido de activación CRISPR (m2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Tmem214 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Tmem214, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TMEM214. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Tmem214 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TMEM214 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TMEM214 en células tumorales con expresión de Tmem214 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.