TMEM205 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-408587-LAC

TMEM205 codifica una proteina transmembrana multipasso che si localizza sulle membrane cellulari ed è stata implicata nella regolazione del traffico intracellulare e dei processi di trasporto associati alle membrane. Un’espressione alterata di TMEM205 è stata collegata a cambiamenti nella gestione dello stress cellulare e nei fenotipi di trasporto dei farmaci, rendendola rilevante per studi sull’adattamento delle cellule tumorali e sui meccanismi di chemioresistenza. In quanto proteina di membrana con un’annotazione funzionale limitata, TMEM205 viene spesso studiata mediante perturbazioni dell’espressione per definire la connettività delle vie di segnalazione, inclusi gli effetti sulla dinamica delle vescicole, sulla permeabilità di membrana e sui programmi di risposta cellulare. Queste caratteristiche rendono TMEM205 un bersaglio utile per la genomica funzionale nella biologia del cancro e nella ricerca di fisiologia cellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale TMEM205 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di TMEM205 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TMEM205 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione TMEM205, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TMEM205. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo TMEM205 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.