TMEM175 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-413613

Descripción general

TMEM175 codifica un canal transmembrana localizado en lisosomas y endosomas tardíos que contribuye a la homeostasis iónica del orgánulo y a la estabilidad del pH luminal. Al regular la función lisosomal, TMEM175 influye en el flujo autofágico, el tráfico endolisosomal y las vías de proteostasis que controlan la degradación de proteínas y orgánulos dañados. La alteración de la actividad de TMEM175 se ha relacionado con una depuración dependiente de lisosomas alterada y con respuestas de estrés celular, lo que conecta a este gen con mecanismos relevantes para la neurodegeneración. Por ello, TMEM175 se estudia en el contexto de la biología lisosomal, la comunicación cruzada con el control de calidad mitocondrial y las vías que modulan la adaptación inflamatoria y metabólica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TMEM175 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TMEM175 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TMEM175 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TMEM175 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TMEM175.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TMEM175 para la investigación de la señalización de TMEM175, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TMEM175 críticos para la función de TMEM175
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TMEM175 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TMEM175 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TMEM175 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TMEM175. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TMEM175 (h) y el plásmido HDR TMEM175 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TMEM175 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TMEM175 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.