Plásmido CRISPR de Activación (h) TMEM132A: sc-412402-ACT

TMEM132A (proteína transmembrana 132A) es una proteína humana de membrana de paso único implicada en la comunicación célula–célula y en la regulación de la señalización relacionada con la adhesión en la superficie celular. La expresión de TMEM132A se ha vinculado a la biología neuronal y glial, incluidas vías que influyen en la organización del citoesqueleto y en procesos de señalización asociados a la membrana que moldean la morfología y la conectividad celulares. Estudios genéticos y de expresión han asociado TMEM132A con fenotipos neuropsiquiátricos y del neurodesarrollo, lo que respalda su relevancia para investigar mecanismos de la función neuronal y la organización de circuitos. Como factor asociado a la membrana, TMEM132A también es útil para estudiar cómo las señales extracelulares se traducen en respuestas intracelulares que afectan la diferenciación y la respuesta al estrés.

TMEM132A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TMEM132A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TMEM132A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TMEM132A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TMEM132A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TMEM132A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TMEM132A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TMEM132A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TMEM132A en células tumorales con expresión de TMEM132A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.