TMEM132A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-412402-ACT

TMEM132A (proteína transmembrana 132A) é uma proteína humana de membrana de passagem única implicada na comunicação célula–célula e na regulação de sinalização relacionada à adesão na superfície celular. A expressão de TMEM132A tem sido associada à biologia neural e glial, incluindo vias que influenciam a organização do citoesqueleto e processos de sinalização associados à membrana que moldam a morfologia e a conectividade celular. Estudos genéticos e de expressão associaram TMEM132A a fenótipos neuropsiquiátricos e do neurodesenvolvimento, sustentando sua relevância para investigar mecanismos da função neuronal e da organização de circuitos. Como fator associado à membrana, TMEM132A também é útil para explorar como sinais extracelulares são traduzidos em respostas intracelulares que impactam a diferenciação e a responsividade ao estresse.

TMEM132A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TMEM132A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TMEM132A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TMEM132A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TMEM132A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TMEM132A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TMEM132A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TMEM132A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TMEM132A em células tumorais com expressão de TMEM132A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.