TMC8 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406378

Descripción general

TMC8 (canal transmembrana tipo 8; también conocido como EVER2) codifica una proteína de membrana multipaso implicada en la regulación de la señalización de queratinocitos y células inmunitarias, con funciones descritas en el control de la homeostasis intracelular del zinc y de las respuestas transcripcionales posteriores. Se ha relacionado con vías que influyen en la defensa antiviral, la diferenciación epidérmica y la señalización inflamatoria, incluida la modulación de respuestas asociadas a NF-κB en ciertos contextos. Las alteraciones genéticas de TMC8 se asocian con susceptibilidad a la epidermodisplasia verruciforme y con un control alterado del huésped frente a infecciones cutáneas por el virus del papiloma humano, lo que respalda su relevancia en la biología de la barrera cutánea y en estudios de interacción virus–huésped. Como factor asociado a membrana, TMC8 se investiga con frecuencia para comprender cómo la señalización dependiente de iones se integra con la inmunidad epitelial y la persistencia de la infección viral.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TMC8 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TMC8 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TMC8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TMC8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TMC8.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TMC8 para la investigación de la señalización de TMC8, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TMC8 críticos para la función de TMC8
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TMC8 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TMC8 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TMC8 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TMC8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TMC8 (h) y el plásmido HDR TMC8 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TMC8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TMC8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.