TMC8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406378

概要

TMC8（transmembrane channel-like 8；EVER2 とも呼ばれる）は、角化細胞および免疫細胞のシグナル伝達の制御に関与するとされる多回膜貫通型膜タンパク質をコードしており、細胞内亜鉛恒常性の調節や、それに続く転写応答の制御に役割を持つことが報告されています。抗ウイルス防御、表皮分化、炎症性シグナル伝達に影響する経路との関連が示されており、状況によっては NF-κB 関連応答の調節にも関与するとされています。TMC8 の遺伝学的な異常は、疣贅状表皮発育異常症（epidermodysplasia verruciformis）への感受性や、皮膚のヒトパピローマウイルス感染に対する宿主側の制御の変化と関連しており、皮膚バリア生物学およびウイルス—宿主相互作用研究における重要性を裏づけています。膜関連因子として、TMC8 はイオン依存的なシグナル伝達が上皮免疫やウイルス感染の持続とどのように結びつくか、という観点からしばしば研究されています。

TMC8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTMC8遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TMC8内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TMC8のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TMC8タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TMC8シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TMC8欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TMC8の機能に不可欠なTMC8エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TMC8ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TMC8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTMC8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TMC8遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TMC8 HDRプラスミド（h）および TMC8 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTMC8ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTMC8標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。