TLR9 Double Nickaseプラスミド (m): sc-429882-NIC

マウスのTlr9は、Toll様受容体9（TLR9）をコードしており、エンドソームに局在するパターン認識受容体として、微生物由来および自己由来DNAに含まれる非メチル化CpGモチーフを検知する。リガンド結合とエンドソーム成熟に伴い、TLR9は主にMYD88を介してシグナルを伝達し、IRAK–TRAF6カスケードを活性化することで、NF-κBおよびIRF7依存的な転写を誘導し、炎症性サイトカインやI型インターフェロンの発現を促進する。この経路は、マクロファージ、樹状細胞、B細胞における自然免疫の活性化を統合的に制御し、抗原提示や獲得免疫の偏り（分極）形成に影響を与える。TLR9シグナルの制御異常は、マウスモデルにおいて、炎症性・自己免疫性表現型、核酸に対する異常応答、ならびに腫瘍と免疫の相互作用に関与することが示唆されている。

TLR9 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Tlr9 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Tlr9内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Tlr9の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Tlr9が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。