Plasmide CRISPR/Cas9 KO TLR7 (m): sc-431302

Présentation

Tlr7 code le récepteur Toll‑like 7 (TLR7), un récepteur endosomal de reconnaissance de motifs (PRR) qui détecte l’ARN simple brin ainsi que des ligands imidazoquinoliniques synthétiques afin d’initier la signalisation de l’immunité innée. Après activation, TLR7 s’associe à MYD88 et active la cascade de signalisation IRAK–TRAF6, entraînant une transcription dépendante de NF‑κB et d’IRF7 des interférons de type I et de cytokines pro‑inflammatoires, ce qui façonne les défenses antivirales et les réponses des lymphocytes B. Chez la souris, l’activité de TLR7 influence l’activation des cellules dendritiques, la dynamique des centres germinatifs et les environnements cytokiniques qui coordonnent l’immunité adaptative. Une signalisation TLR7 dérégulée a été impliquée dans des phénotypes inflammatoires et auto‑immuns et est fréquemment étudiée dans des modèles d’activation immunitaire systémique et de détection des agents pathogènes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TLR7 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tlr7 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tlr7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tlr7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TLR7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tlr7 pour l'étude de la signalisation de TLR7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tlr7 essentiels à la fonction de TLR7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tlr7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TLR7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TLR7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tlr7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TLR7 plasmide HDR (m) et le TLR7 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tlr7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tlr7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.