Tim17B Double Nickaseプラスミド (h): sc-411441-NIC

TIMM17Bは、ミトコンドリア内膜に存在するTIM23トランスロカーゼの必須構成要素であるTim17Bをコードしており、核にコードされたタンパク質のミトコンドリアへの輸入および挿入を仲介します。ミトコンドリアのタンパク質恒常性を支えることで、Tim17Bは酸化的リン酸化能、ミトコンドリア膜電位の維持、ならびにマトリックスおよび内膜におけるプロテオスタシスに寄与します。TIM23複合体の機能が攪乱されると、エネルギー代謝が破綻し、ミトコンドリアのアンフォールドタンパク質応答（mtUPR）などのミトコンドリアストレスシグナル伝達経路が活性化され得るため、TIMM17Bの生物学は、より広範な細胞適応プログラムとも結び付きます。ミトコンドリア輸入因子として、TIMM17Bは、がん細胞代謝や神経変性に関連するミトコンドリアストレス表現型に関わる、バイオエネルギーの再プログラム化およびミトコンドリア機能不全の研究で頻繁に検討されています。

Tim17B ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TIMM17B 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TIMM17B内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TIMM17Bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TIMM17Bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。