TIM-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-431363

Visão geral

Havcr2 codifica o receptor imunorregulador TIM-3, uma proteína de membrana do tipo I expressa em múltiplas linhagens imunes, incluindo células T ativadas, células T reguladoras, células dendríticas e subconjuntos da imunidade inata. O TIM-3 integra sinais que moldam os limiares de ativação das células T, a tolerância e a diferenciação efetora, influenciando a produção de citocinas e a função da sinapse imunológica no contexto da estimulação por antígeno. Por meio de interações com ligantes como a galectina-9 e a fosfatidilserina, o TIM-3 contribui para vias associadas à disfunção de células T e à exposição crônica a antígenos, alinhando-se a programas de exaustão imune e à modulação de circuitos inflamatórios. Em modelos murinos, a biologia de Havcr2/TIM-3 é amplamente investigada em cenários de autoimunidade, infecção crônica e imunologia de tumores para compreender a homeostase imune e a inflamação específica de tecidos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TIM-3 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Havcr2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Havcr2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Havcr2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TIM-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Havcr2 para a investigação da sinalização de TIM-3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Havcr2 críticos para a função TIM-3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Havcr2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo TIM-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo TIM-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Havcr2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo TIM-3 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR TIM-3 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Havcr2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Havcr2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.