Plásmido Doble Nickase (h) Thyroperoxidase: sc-402102-NIC

El TPO humano codifica la tiroperoxidasa, una glucoproteína de membrana que contiene hemo, localizada en la superficie apical de las células foliculares tiroideas, y que cataliza reacciones clave de yodación y acoplamiento necesarias para la biosíntesis de hormonas tiroideas. Al oxidar el yoduro y favorecer la formación de yodotirosinas sobre la tiroglobulina, la TPO integra una actividad enzimática dependiente del estado redox con el procesamiento hormonogénico en la interfaz con el coloide tiroideo. La función de la TPO está estrechamente vinculada al manejo del yoduro y a las vías de maduración de la tiroglobulina, sosteniendo la homeostasis endocrina mediante una producción hormonal regulada. La actividad desregulada de la TPO o su reconocimiento por el sistema inmunitario se asocia con disfunción tiroidea y ofrece un punto de entrada molecular para estudiar características autoinmunes y metabólicas de la enfermedad tiroidea.

Thyroperoxidase El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TPO en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TPO. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TPO. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TPO alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.