Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Thrombospondin 5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402797
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Thrombospondin 5 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Thrombospondin 5, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Thrombospondin 5 Anticuerpo (F-7): sc-374660
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Thrombospondin 5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402797 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
COMP codifica la trombospondina 5, una glucoproteína pentamérica de la matriz extracelular, altamente abundante en cartílago y tendón, que favorece el ensamblaje de la matriz y la biomecánica tisular. La trombospondina 5 interactúa con colágenos, proteoglicanos y receptores de superficie celular para modular la adhesión de los condrocitos, la mecanotransducción y la organización de la matriz extracelular. Contribuye a la homeostasis del cartílago al influir en la fibrilogénesis del colágeno y en las vías de recambio de la matriz que dan forma al desarrollo esquelético y a la integridad articular. La desregulación de la función de COMP y del depósito de matriz se asocia con displasias esqueléticas hereditarias y fenotipos de cartílago degenerativo, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar la biología de la matriz extracelular musculoesquelética.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Thrombospondin 5 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen COMP en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del COMP junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de COMP tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Thrombospondin 5.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en COMP para la investigación de la señalización de Thrombospondin 5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de COMP críticos para la función de Thrombospondin 5
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de COMP para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Thrombospondin 5 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Thrombospondin 5 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus COMP. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Thrombospondin 5 (h) y el plásmido HDR Thrombospondin 5 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología COMP para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana COMP definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.