Thrombospondin 5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402797-ACT

COMPはトロンボスポンジン5をコードしており、トロンボスポンジン5は五量体のマトリセルラー糖タンパク質で、軟骨の細胞外マトリックスに高濃度に存在し、コラーゲン線維形成、マトリックスの組み立て、ならびに筋骨格系組織におけるメカノトランスダクションに寄与します。トロンボスポンジン5は、コラーゲン、プロテオグリカン、細胞表面受容体との相互作用を介して、軟骨細胞の接着や、小胞体におけるプロテオスタシスおよび細胞外マトリックス恒常性を協調的に制御するシグナル伝達経路に影響を与えます。COMPの発現異常や病原性バリアントは、骨格異形成や変性関節の表現型と関連しており、マトリックス構造の変化が軟骨機能障害につながることを示しています。マトリックス関連の調節因子として、COMPは軟骨生物学、結合組織の発生、細胞外マトリックスのリモデリングモデルにおいて広く研究されています。

Thrombospondin 5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性COMPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Thrombospondin 5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における COMP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCOMP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Thrombospondin 5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCOMP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるThrombospondin 5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCOMP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるThrombospondin 5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。