Thrombospondin 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401207-ACT

THBS2 codifica a trombospondina 2, uma glicoproteína matricelular secretada que modula a organização da matriz extracelular, a adesão célula–matriz e a remodelação tecidual. A trombospondina 2 influencia a sinalização associada a integrinas e ao CD36, regula a atividade de metaloproteinases de matriz e molda respostas angiogênicas e inflamatórias no microambiente estromal. Por meio desses processos, o THBS2 é comumente estudado em contextos de fibrose, reparo de feridas e interações tumor–estroma, nos quais a dinâmica da matriz extracelular controla a migração e a sobrevivência celular. Alterações na expressão de THBS2 têm sido associadas a remodelação vascular aberrante e desregulação da matriz extracelular relevantes para múltiplos estados fisiopatológicos.

Thrombospondin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de THBS2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Thrombospondin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus THBS2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição THBS2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Thrombospondin 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus THBS2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Thrombospondin 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Thrombospondin 2 em células tumorais com expressão de THBS2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.