Thrombin R Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400556-ACT

F2R codifica o receptor ativado por protease 1 (PAR1), um GPCR de sete domínios transmembrana que é ativado por proteólise mediada pela trombina para iniciar sinalização tendenciosa (biased) por meio de proteínas G heterotriméricas. O PAR1 acopla-se de forma proeminente às vias de Gαq/11, Gα12/13 e Gαi para regular a sinalização da fosfolipase C, a mobilização de Ca2+ intracelular, a remodelação do citoesqueleto dirigida por RhoA, as cascatas de MAPK e programas transcricionais que influenciam a função da barreira endotelial, a ativação plaquetária e respostas inflamatórias. Em contextos vasculares e estromais, F2R integra sinais da coagulação com migração e adesão celulares e alterações de permeabilidade, tornando-se relevante para estudos de inflamação associada à trombose, aterogênese e sinalização no microambiente tumoral. A desregulação da sinalização do PAR1 tem sido associada a reatividade vascular aberrante e fenótipos pró-inflamatórios em múltiplos modelos de doença, sustentando seu uso como alvo mecanístico em pesquisas de hemostasia e biologia vascular.

Thrombin R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de F2R sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Thrombin R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus F2R em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição F2R, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Thrombin R. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus F2R nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Thrombin R no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Thrombin R em células tumorais com expressão de F2R silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.